衛宮 士郎
男主角。身份是穗群原學園學生以及見習的魔術師。10年前冬木市大火中的唯一生還者。被身為魔術師的衛宮切嗣所救出並收養，但是醒來之後卻記憶全失，受衛宮切嗣的影響，是個英雄迷，並發誓長大之後一定要成為「正義的伙伴」，拯救所有受到苦難的人們。所以只要是他人的請求他從不會拒絕，擅長修理或是飯菜之類的東西。雖然是魔術師，不過除了強化和投影，並不會其他魔術。
Saber 
本作FATE線的女主角。與主角訂定契約‧劍士的英靈，真實身份是不列顛傳說的英雄亞瑟王，真名為阿爾托利亞的女性。她的職階(class)被譽為所有從者(servant)中最優秀的。性格忠誠老實一本正經，不愛言談，不過有時也會顯現出少女該有的樣子。有很強的自我恢復能力，而且能吃能睡。擁有亞瑟王的神劍Excalibur，平時用風王結界令劍處於隱形狀態。特別喜歡獅子。
遠坂 凜 
本作UBW線的女主角。與士郎在同一個學園的美女魔術師。有著悠久歷史的魔術名門遠坂家的繼承人，傳說遠坂家祖上的大師父是魔法使，而遠坂家世代為冬木市這塊土地的管理者,繼承先父的遺志參加聖杯戦爭。在學校扮演著優等生的身份，但事實她是一名愛嘲諷和作弄別人的小惡魔。作為魔術師有著高強的實力，不過經常在重要的地方發生失誤。
Archer
與凜訂定契約‧弓之騎士的英靈。經常嘲諷他人的現實主義者，不過與凜之間互相有著堅強的信任。明明是Archer卻喜歡近身戰，拿手的武器是干將莫邪，超人的弓技直到Fate/hollow ataraxia才展現。具有魔術師的能力「固有結界」，也擁有痛擊狂戰士（Berserker）的實力。他本人自稱由於召喚時的事故忘了自己是哪裡來的，其真實身份是未來成熟的衛宮士郎，他戰鬥的一個重要目的是要殺死衛宮士郎以避免重演他自己悲慘的命運。拿手的技術是家事全能，凜曾稱讚過他泡的紅茶非常好喝。
伊莉雅蘇菲爾‧馮‧愛因斯柏
簡稱伊莉雅（イリヤ，Iriya），七名御主（マスター，master）之一，愛因斯柏家為了聖杯戰爭而養育長大的人造人，而她也是愛因斯柏為這次聖杯戰爭而準備的聖杯。因為被當成道具，所以個性上有點扭曲，平常是坦率天真的女孩子，不過也有冷酷無情的一面，是個使人想到雪的女孩。父親是衛宮切嗣，來日本的目的之一就是來殺死切嗣，得知切嗣死亡後便把注意力放在士郎身上。
Berserker
狂戰士的英靈。其身份是海格力斯（Heracles,或譯為赫拉克勒斯、赫丘力士),是希臘神話中最偉大的英雄，身長超過2m，擁有12次不死身的寶具「十二的試練」。海格力斯是這次愛因斯柏家犯規招喚來的從者（servant），以犧牲理性的方式換取壓倒性的破壞力。
藤村 大河
穗群原學園的教師，是士郎的班導，暱稱「藤姊」。同時是弓道部顧問，劍道5段.非常討厭被稱為「老虎」(tiger)，被這樣叫的話會非常生氣。但是身上帶著竹劍加上虎紋的皮帶一般被認為是虎迷。父親是黑道老大，家裡很有錢，不過還是經常去衛宮士郎家蹭飯吃，是個天真率直的人。
間桐 櫻
本作HF線的女主角。間桐慎二的妹妹，比士郎低一個年級，同時是弓道社社員，對士郎像是妹妹一樣的存在。總是充滿笑容，擁有沉穩的性格，過去個性十分陰暗，後來由於藤村大河和衛宮士郎的影響變得比較開朗，現在每日都到士郎的家準備早飯、晚飯。本名是遠坂櫻，與凜是姐妹，因魔術師家族只會把魔術刻印傳給其中一個繼承者所繼承，而間桐家同時要求讓渡一個擁有魔術迴路的人當繼承人，所以遠坂櫻成為了間桐櫻。
間桐 慎二
間桐櫻的哥哥，個性相當差，但因外貌和才能與家室相當受女孩子歡迎。士郎的同班同學，與士郎關係不錯，同時是弓道部副主將。雖然出生在魔術世家，但到了慎二這代已經完全沒有魔術迴路，不過仍具備相當魔道知識，因為種種原因他也成了參加聖杯戰爭的魔術師。
Rider
騎士的英靈。其身分為希臘神話中的女妖美杜莎（Medusa，又譯梅杜莎）。如同此名有著駕馭傳說中天馬的騎乘能力，具有極高的機動性，寶具為「自已封印‧暗黑神殿」、「他者封印‧鮮血神殿」與「英騎之疆繩」，Rider這個職階同時必需擁有強力寶具才能擔任。也擁有特殊技能石化魔眼。原為間桐櫻的從者（servant），但因為某些原因將令咒轉讓予間桐慎二。
美綴 綾子
士郎的同學，擔任弓道部的社長，個性豪爽直快，不論男女皆受歡迎，是遠坂凜的少數朋友之一。曾被Rider吸過血，對Rider有恐懼感。
（偽）Assassin
暗殺者的英靈，有「気配遮斷」這樣能偷偷靠近暗殺對象的特殊技能。其身份是佐佐木小次郎，但歷史上並無這個人物，即是為架空的英靈。由Caster召喚訂定契約，生命只能維持短暫的時間，而且不能離開柳洞寺的大門，只能充當守門人。對聖杯沒興趣，只是想與強者過招。沒有任何寶具，但憑著一己之力練出了「燕返」(多重次元屈折現象)。
Caster
魔術師的英靈，可使用自神話時代以後就不存在的高等魔術。用計殺死前主人後被葛木宗一郎撿到，與葛木訂下契約(非正規御主)。因自身也是魔術師的關係所以能召喚servant,亦因此她召喚了Assassin，並以寺廟當作根據地，擅長策略。寶具是「Rule breaker」，用來破除任何契約。真實身份為米蒂亞。
葛木 宗一郎
穗群原學園的教師，忠誠老實沉默寡言而非常嚴格的人物，在學生們之中的評價其實不壞。在柳洞寺寄宿，是Caster的master。過去是殺人鬼，曾有擊倒過Saber的紀錄，沒有目標，純粹協助Caster取得聖杯。
柳洞 一成
與士郎同年級的學生會長，也是士郎的朋友，忠誠老實認真的好青年。身為柳洞家的長子，是柳洞寺的繼承人，具有看穿遠坂凜的本質的尖銳洞察力。
Lancer
長槍騎士的英靈。個性自我豪放不羈，重視約定勝於性命。手中拿的是寶具「刺穿死棘之槍」，號稱必中心臟的魔槍，另一招為「突穿死翔之槍」，以足以炸飛一個軍隊的威力型為主。真身為愛爾蘭神話英雄庫丘林（Cu Chulainn，又名庫夫林）
庫夫林（Cú Chulainn）是喀爾特神話中半人半神的英雄，光之神魯格（Lugh）的兒子，活躍在公元1世紀左右Conor MacNessa王統治下的愛爾蘭部族國家Alster。原名瑟坦特(Sétanta)，他7歲的時候即徒手殺死鐵匠庫林的猛犬，因內疚而改名Cú Chulainn，意即為庫林的猛犬，並立誓一生不吃狗肉。之後為了與愛人Emer結婚，通過影之國(Isle of Skye)女王斯卡哈(Scathach)的考驗，學到了斯卡哈所傳授的精湛武藝、兵法，後與影之國女戰士Aífe生下兒子Connla，並從斯卡哈手上得到能破壞內臟的詛咒之魔槍(Gae Bulg)。完成影之國的考驗後，回到故國與Emer結婚，接著活躍在前線保衛自己的祖國。他在戰場上所向披靡，只要開始戰鬥，頭髮會變得火紅，眼光懾人，令敵人望而生畏。然而跟他在戰場上的風光相比，他的一生非常不幸，先因戰爭而殺死同為斯卡哈弟子的好友Ferdia，後因與Emer結婚而被Aífe報復，在不知情的情況下，殺死了自己的唯一的兒子。最後被敵人Medb的奸計陷害，撕毀了自己的誓言，吃了狗肉，最後被Medb使用自己的詛咒之魔槍刺死。臨死之際他把自己綁在石柱上，眼望自己的祖國站著死去。
綁住Chulainn死去的石柱現在成為北愛爾蘭一塊有爭議之石，因為新教徒跟天主教徒都宣稱自己是Chulainn的後裔，是石柱的繼承者。
言峰 綺禮
此次的聖杯戰爭擔任監督的神父，有著言行複雜常人不能理解的地方。曾參加上次（第4次）的聖杯戰爭，不過被切嗣殺死，後來心臟被聖杯流出的黑色物質填補。實質上第五次聖杯戰爭中，他是遊戲的最大作弊者，控制了兩個從者，對士郎來說是相當於「絕對惡」的存在。遠坂凜在魔術方面的師兄，熱愛吃麻婆豆腐。
Gilgamesh
本作幻之第八名從者（servant），真名為英雄王「基加美修」（ギルガメッシュ/Gilgamesh），為蘇美爾傳說中烏魯克的國王。前回（第4次）聖杯戰爭中與Saber（セイバー）留到最後的英靈。曾在前次對決時向Saber表白但遭失敗，也出現在動畫劇情中。個性超級自大，完全的自我中心，特殊技能是大意，但本人自稱「不驕傲的哪算是王！」。寶具是王之財寶（Gate of Babylon），源自於基加美修收集全世界的寶具，將無數的珍貴兵器當成箭射出。寶具「天之鎖」可以鎖死任何有神性的英靈，還擁有對界寶具─Enuma elish，如果基加美修認真起來將是本作最強！
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